宫颈癌是公认的唯一发病机理明确、癌前病变周期较长、可以预防和阻断的恶性肿瘤，如果早期发现和治疗癌前病变，子宫颈癌的预防和治愈率几乎接近100%[1]。今年第二十一次全国子宫颈癌协作组工作会议明确提到——现有许多研究表明，p16/ki-67、宫颈癌基因甲基化等检测方法，在宫颈癌初筛阳性后的精细分流管理中将发挥核心作用，这也预示了宫颈癌筛查策略未来的发展趋势。
迪安生物近日新上市P16/Ki-67检测试剂盒（免疫细胞化学法）（浙杭械备20240533、浙杭械备20240534），自有免疫组化平台可实现原位杂交（EBER）以及细胞双染的完整试验，为实验室与医院提供包含HPV检测试剂、TCT检测产品等多样选择。
1. 宫颈癌筛查方法：传统 VS. 双染
宫颈癌的发生、发展是一个由宫颈不典型增生连续发展至宫颈癌的过程，高危型 HPV 持续性感染是宫颈癌及其癌前病变发生的主要原因[2]。宫颈癌早期或无明显特异性症状，难以经临床表现进行早期筛查，且癌前病变时期较长。因此，早期筛查的准确性对宫颈癌的诊疗及预防具有较高价值。
传统检测方法
1950年以来普遍采用宫颈巴氏涂片进行宫颈癌筛查，早期病变检出率已明显提升，但诊断准确度仍不理想，有文献报道巴氏涂片的假阴性率至少为15%～20%[3]，Joseph等报道巴氏涂片的假阴性率甚至高达53%[4]，主要原因是涂片中有诊断意义的细胞太少。传统巴氏涂片制片时刮板上的细胞只有少量被转移到玻片上，且可能存在细胞范围不全、细胞重叠、背景不清等情况。
随着医疗技术发展，目前宫颈癌筛查主要采用宫颈液基细胞学检查（fluid based thin-layer cytological test，TCT）、人乳头瘤病毒( human papilloma virus，HPV)检测，或两者联合筛查。
迪安生物TCT检测产品
TCT和HPV检测均存在相对不足，如宫颈液基细胞学筛查无明确意义的非典型鳞状细胞(atypical squamous cells of undermined significance，ASC-US)诊断过多[5]，HPV检测难以排除一过性感染的影响，对于人口众多的地区和国家，检测特异性不高，将带来后续大量的临床工作[6]。p16/Ki-67免疫细胞化学双染法则可有效弥补HPV检测的低特异度及细胞学检测的低灵敏度，降低漏诊及不必要的阴道镜检查。
细胞双染检测方法
早在2011年，临床上就提出采用 p16 与 Ki-67 免疫细胞化学双染的方法来发现高级别鳞状上皮内病变(high-grade intraepithelial neoplasia，HSIL)和子宫颈鳞状细胞癌 (squamous cell carcinoma，SCC)。商业化双染试剂盒的出现，使这一技术在国内宫颈液基细胞学诊断实践中受到关注。
多项研究表明p16/Ki-67免疫细胞化学双染法具有以下优点：
①针对HPV初筛阳性分流，具备相对的特异性和灵敏度优势，且对不同疾病类型总检出率更高，能够有效提高 HSIL阳性检出率[7]；
②可较好地区分细胞学阴性病灶，降低宫颈癌的漏诊率及阴道镜检误诊率[8]；
③检测所需样本较易获取，患者机体造成的损伤较小，重复性高，可避免患者发生不耐受现象[9]；
④对LSIL的转归预测有一定价值[10]；
⑤判读不依赖形态学，所获结果易于观察分辨，有效减轻医生工作负担[11]。
综上，p16/Ki-67细胞学双染检测对于宫颈癌初筛异常后的分流及管理有重要的临床参考价值，可认为其在HPV单独初筛阳性后的分流方面优于细胞学分流。
2. 什么是p16/Ki-67免疫细胞化学双染法？
p16
p16是一种抑癌蛋白，主要促进E2F和pRB结合来调控细胞周期。当细胞持续性感染HR-HPV后，其产生的病毒性E7蛋白会替代E2F，与pRB结合，导致无法形成E2F-pRB复合物，破坏细胞周期调控机制，导致细胞持续增殖，最终出现p16蛋白过度表达并累积。
细胞周期正常表达与失控表达示意图
Ki-67
Ki-67是目前应用最广泛、最可靠的细胞增殖标志物之一，与多种肿瘤的发展、浸润、转移及预后有关，表达于鳞状上皮细胞的细胞核，其高表达预示癌前病变的发生及组织恶变。
p16/Ki-67
正常细胞中p16和Ki-67表达相互排斥，若同时表达，则提示细胞周期调控失常，是高危型HPV感染的标志，可提示较高级别病灶。
p16/ki-67双染检测阴性：提示样本中未检测到高危型HPV持续性感染引起的p16/ki-67蛋白共表达，患者遵医嘱随访；
p16/ki-67双染检测阳性：提示高危型HPV持续性感染，与高级别鳞状上皮内病变（HSIL）相关，患者需要及时就诊，在医生的帮助下行阴道镜检查，避免机体内存在癌前病变的情况。
p16/Ki-67 表达图解
3. 金迪安®P16/Ki-67检测试剂盒
迪安生物最新上市p16/Ki-67检测试剂盒，有效完善宫颈癌筛查诊断方案，试剂染色结果对比明显，色彩鲜艳，检测结果直观，易于判读。
染色结果判读示例
p16 单染：胞浆棕黄色着色为（+），表示细胞周期停止。
Ki-67 单染：胞核玫红色着色为（+），提示细胞增值。
p16/Ki-67 双染：在同一个细胞中核被染成红色、浆被染成玫棕黄色，且处于同一显微镜焦距下，即判读为 p16/Ki-67 双染（+），解读不依赖于细胞形态学标准，一张片子显微镜下发现一个双染色细胞即说明双染结果呈阳性。
参考文献
[1]LORENZI N P C，TERMINI L,FERREIRAFILHO E S，et al. A positive HPV test with positive pl6/Ki-67 doublestaining in self-sampled vaginal material is an accuratetool to detect women at risk for cervical cancer[j]. Canc-er Cytopathol,2022,130(1) :41-54.
[2]MABOTJA M C，LEVIN J,KAWONGA M Beliefs andperceptions regarding cervical cancer and screening asso-ciated with Pap smear uptake in Johannesburg: a crosssectional study[J].PLOS ONE,2021,16(2) :e0246574.
[3]Frable WJ, Austin RM， Greening SE，et al. Medicolegal affairs. International Academy of Cytology Task Force summary. Diagnostic Cytology Towards the 21st Century：An International Expert Conference and Tutorial. Acta Cytol，1998，42(1)：76-119.
[4]Joseph MG，Cragg F，Wright VC，et al. Cyto-histological correlates in a colposcopic clinic：a 1-year prospective study. Diagn Cytopathol，1991，7(5)：477-481.
[5]李辉,彭敏,武娇,等.p16/Ki67细胞学双染在子宫颈癌前病变及宫颈癌筛查中的应用[J].北京大学学报(医学版),2023,55(06):1144-1148.DOI:10.19723/j.issn.1671-167X.2023.06.030.
[6]李辉,彭敏,武娇等.p16/Ki67细胞学双染在子宫颈癌前病变及宫颈癌筛查中的应用[J].北京大学学报(医学版),2023,55(06):1144-1148.DOI:10.19723/j.issn.1671-167X.2023.06.030.
[7]吴艳,王瑾,解浩然,等.高危型HPV分型、TCT、P16/Ki-67双染在宫颈癌筛查中的价值[J].中国计划生育学杂志,2022,30(12):2875-2879.
[8]叶明龙.p16/Ki67免疫细胞化学双染法在宫颈癌筛查中的应用研究[J].实用妇科内分泌电子杂志,2023,10(17):13-15.
[9]王丽,戴月.p16/Ki-67双染、液基细胞学检测系统检测对宫颈疾病的诊断价值[J].中国初级卫生保健,2023,37(10):108-110.
[10]李贇,王彩红,潘晋兵.p16/Ki67双染检测预测宫颈非典型鳞状上皮增生病变转归价值[J].中国计划生育学杂志,2023,31(06):1465-1468+1498.
[11]赵芳,马德勇,王婷婷,等.宫颈液基细胞学p16及其联合高危HPV检测在宫颈癌和癌前病变筛查中的诊断价值[J].疑难病杂志,2023,22(04):390-394+401.
